酵母双杂“7+7”,定义筛库金标准,您学会了吗?
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发布时间：2024-10-24 18:40
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时间：2024-11-09 06:21
酵母双杂交系统是研究转录因子GAL4性质的基础上建立的蛋白互作技术，广泛应用于筛选、鉴定、验证蛋白互作、探究互作机理及绘制PPI等。
在进行酵母双杂交技术前，需要进行以下准备：
1. 明确诱饵蛋白性质。可以使用预测工具确定蛋白类型，如是否有信号肽或结构区域，或通过亚细胞定位实验来明确。
2. 准备文库材料。
为了确保筛库的准确性，核体系筛库采用"7+7"金标准，具体步骤如下：
1. 诱饵基因测序，确保诱饵克隆序列正确。
2. 检测诱饵载体对酵母细胞是否有毒性，确认后续筛选的可行性。
3. 进行阴阳性对照及自激活检测，验证实验成功，确保诱饵载体在DDO、TDO、QDO培养基上正常生长。
4. 初筛阶段，通过筛选确定有多少个单克隆。
5. 进行复筛，再次筛选确定单克隆数量，确保筛选的准确性。
6. 回转验证阶段，分离AD或全长验证，确定有多少个真阳性基因。
7. 点板验证，根据文章需求进行个性化展示，确保结果一致性。
